RBM5、EGFR和KRAS在非小细胞肺癌中的表达及其意义

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（）文章编号：００７－４２８７２０１９０２－０３０３－０６１

、ＢＭ５ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ在非小Ｒ

细胞肺癌中的表达及其意义

田　畅１，邸　鑫１，金　鑫１，丛　珊１，刘伽莹１，李然伟２，王　珂１＊赵　敏１，

）（呼吸与危重症医学科，泌尿外科，吉林大学第二医院１．吉林长春１２．３００４１

目的　检测非小细胞肺癌组织Ｒ并进一步分析上述三种基因表达与非小摘要：ＢＭ５、ＥＧＦＲ及ＫＲＡＳ表达水平，细胞肺癌患者临床、病理相关性，为肺癌早期诊断及分子靶向治疗提供依据。方法　收集２０１７年８月至２０１８年８月采用Ｗ在吉林大学第二医院接受手术的４２例ＮＳＣＬＣ患者癌组织及癌旁组织标本，ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及实时荧光定量ＰＣＲ　（方法检测Ｒ同时采用ＥＣＲ）ＢＭ５、ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ蛋白及ｍＲＮＡ相对表达水平，ＬＩＳＡ方法检测４４例患者外ＲＴＰ－ｑ周血清中上述基因表达水平，并进一步分析其临床病理相关性。结果　在组织学分析中，与癌旁组织比较，肺癌组织，）降低水平与吸烟史、淋巴结转移等相关；中ＲＥＢＭ５ｍＲＮＡ表达水平降低（０５ＧＦＲ　ｍＲＮＡ表达水平升高（Ｐ＜０．Ｐ＜，；）其中伴有淋巴结转移组中ＥＫ０５ＧＦＲ相对表达量高于无淋巴结转移组（０５）ＲＡＳｍＲＮＡ表达水平增高与０．Ｐ＜０．　淋巴结转移等相关。在血清学Ｅ与健康人比较，肺癌患者血清中Ｒ临床分期、ＬＩＳＡ分析中，ＢＭ５表达水平降低（Ｐ＜，；）其中伴有淋巴结转移组中ＲＥ０１ＢＭ５表达量低于无淋巴结转移组（０５）ＧＦＲ和ＫＲＡＳ表达水平升高（０．Ｐ＜０．Ｐ＜，）表达水平的升高与肺癌患者临床分期及淋巴结转移无显著相关性。结论　肿瘤抑制基因Ｒ０１ＢＭ５在ＮＳＣＬＣ发０．

生发展过程中起到负性作用，而Ｅ血清中ＲＧＦＲ和ＫＲＡＳ起到正性作用；ＢＭ５和ＥＧＦＲ可能成为判断肺癌早期诊断及预测转移的新指标，提供肺癌治疗新靶点。

表皮生长因子受体；鼠类内瘤病毒癌基因；非小细胞肺癌关键词：ＮＡ结合基序蛋白－５；Ｒ

中图分类号：７３４．２Ｒ文献标识码：Ａ

１

，ｘｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＲＢＭ５，ＥＧＦＲａｎｄＫＲＡＳａｎｄｔｈｅｉｒｓｉｎｉｆｉｃａｎｃｅｉｎａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｎｏｎｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｃａｎｃｅｒＯ　ｉｎｓＭＥ　　　　　　　　　　　　　　ＺＨＡ－ｐｇｐｇ　１１

，（ＩＡＮ　ｈａｎＩ　ｉｎｔｌ．ｈｅｅｃｏｎｄ　ｏｓｉｔａｌｉｌｉｎ　ｎｉｖｅｒｓｉｔｅａｒｔｍｅｎｔｅｓｉｒａｔｏｒｎｄ　ｎｔｉｃａｌ１．ＴＣＤＸｅａＴＳＨｏＪＵＤｏＲａＣ　　　　ｇ，ｐｙ，ｐｐｙｆ　ｆ　　

ｅｄｉｃｉｎｅ，ｅａｒｔｍｅｎｔｒｏｌｏｈａｎｃｈｕｎ１３００４１，ｈｉｎａ）Ｃａｒｅ　ＭＤｏＵＣＣ２．　ｐｇｙ，ｇｆ　

：ｂｓｔｒａｃｔＯｂｅｃｔｉｖｅｈｅａｉｍｏｆｔｈｅｓｔｕｄｉｓｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＲＢＭ５，ＥＧＦＲａｎｄＡ　Ｔ　　　　　　　　　　　　　　　ｙｐｐｊ　ＫＲＡＳｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｔｉｓｓｕｅｓｉｎａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＮＳＣＬＣ，ｔｏａｎａｌｚｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　ｐｙｐ，ａｔｈｏｌｏｉｃａｌａｒａｍｅｔｅｒｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｌｉｔｃａｎｂｅｈｅｌｆｕｌｔｏｒｏｖｉｄｅｃｌｕｅｓｆｏｒｅａｒｌｄｉａｎｏｓｉｓｏｆｌｕｎｃａｎｃｅｒａｎｄｔａｒｅｔｅｄ　　　　　　　　　　　　　ｐｇｐｇｙｐｐｙｇｇｇ　　ａｒｃｉｎｏｍａｔｉｓｓｕｅｆｒｏｍｃｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓｈｅｆｒｅｓｈｏｓｔｏｅｒａｔｉｖｅｓｅｃｉｍｅｎｓｏｆ４２ｃａｓｅｓｏｆｃａｒｃｉｎｏｍａｔｉｓｓｕｅａｎｄａｒａ　　－　Ｔ　　　　　　　　　　ｐｐｐｐＡｕｕｓｔ２０１７ｔｏＡｕｕｓｔ２０１８ａｔｔｈｅＳｅｃｏｎｄＨｏｓｉｔａｌｏｆＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ．ＴｈｅｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｒｅｌａｔｉｖｅ　　　　　　　　　　　　　　ｇｇｐｙｐ　ｔｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＲＢＭ５、ＥＧＦＲａｎｄＫＲＡＳｉｎｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎｄｔｈｅｒｅａｌｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ－　　　　　　　　　　　　　　　ｐｙ　

ＣＲ）．Ａｎｄｔｈｅｒｏｔｅｉｎｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｔｈｅａｂｏｖｅｅｎｅｓｉｎｓｅｒｕｍｏｆ４４ｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄＰｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ＲＴ　　　　　　　　　　　　　　－　ｐｐｇｑｑ

，ｃｂＥＬＩＳＡ．ＲｅｓｕｌｔｓｏｍａｒｅｄｔｏａｒａａｎｃｅｒｏｕｓｔｉｓｓｕｅｓｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲＢＭ５ｍＲＮＡ　ｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｄｅ－－　Ｃ　　　　　　　　ｙｐｐｐｇｙ　　

）；，ｒｅａｓｅｄｉｎＮＳＣＬＣｔｉｓｓｕｅｓ（０５ｎｄｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｗａｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｓｍｏｋｉｎｈｉｓｔｏｒａｎｄｌｍｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｔｈｅｃＰ＜０．ａ　　　　　　　　　　　　ｇｙｙｐ　　，０５）ｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＧＦＲ　ｍＲＮＡ　ｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎＮＳＣＬＣｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜０．ａ　　　　　　　　　　ｐｐｇｙ　ｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｒｏｕ０５）．ＥＧＦＲｉｎｔｈｅｌｍｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｒｏｕｗａｓｈｉｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｎｏｎｌｍｈｎＰ＜０．　　　　　　　　　　　　　　　－ｇｐ（ｙｐｇｐｇｙｐ　（ＰＴｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｓｅｒｕｍ　ＲＢＭ５ｐｒｏｔｅｉｎｏｆｔｈｅａｔｉｅｎｔｓｉｎＮＳＣＬＣｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｃｏｎｔｒｏｌｓ　　　　　　　　　　　　　　　ｐｐｇｙ　，）ａ０１ｎｄｔｈｅｅｘｔｅｎｔｏｆｄｅｃｒｅａｓｅｗａｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｓｔａｔｕｓｏｆｓｍｏｋｉｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．ＩｎｃｒｅａｓｅｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆＫＲＡＳ　　　　　　　　　　　　　　　＜０．ｇｐ　，，ｍＲＮＡｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃａｌｓｔａｅｌｍｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｅｔｃ．ＴｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲＢＭ５，ＥＧＦＲａｎｄＫＲＡＳｍＲＮＡ　　　　　　　　　　　　　ｇｙｐｐａｎｃｅｒｏｕｓｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｓｏｍｅｃｌｉｎｉｃａｌａｔｈｏｌｏｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓ．ＴｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｃｉｎＮＳＣＬＣｔｉｓｓｕｅｓａｎｄａｒａ　　　　　　　　　　　－　　　　ｐｇｐｐ）’（００１．Ｐ＜０．ＥＧＦＲａｎｄＫＲＡＳｒｏｔｅｉｎｉｎａｔｉｅｎｔｓｓｅｒｕｍ　ｗｅｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｈｉｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｈｅａｌｔｈｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕ　　　　　　　　　　　ｐｐｇｙｇｙｇｐ　　ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｈｅｔｕｍｏｒｓｕｒｅｓｓｏｒｅｎｅＲＢＭ５ｐｌａｓａｎｅａｔｉｖｅｒｅｕｌａｔｏｒｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆＮＳＣＬＣ，ｗｈｉｌｅ　Ｔ　　　　　　　　　　　　ｐｐｇｙｇｇｙｐ　；ＥＧＦＲａｎｄＫＲＡＳｌａａｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｕｌａｔｏｒｒｏｌｅｓｅｒｕｍ　ＲＢＭ５ａｎｄＥＧＦＲ　ｍａｂｅｃｏｍｅｎｅｗｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｆｏｒｅａｒｌｄｉａｎｏ－　　　　　　　　　ｐｙｇｙｙｙｇ　　　　

；吉林省自然科学基金项目（基金项目：吉林省科技厅科技成果转化项目（２０１８０１０１１０３ＪＣ）４ＹＹ）２０１６０３０３＊通讯作者

—３０４—

，ＣＮｈｉｎＪＬａｂＤｉａｎ，Ｆｅｂｒｕａｒ２０１９，Ｖｏｌ２３，ｏ．２　　　　ｇｙ，ｉｓａｎｄｒｅｄｉｃｔｉｖｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｌｕｎｃａｎｃｅｒｒｏｖｉｄｉｎｎｅｗｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｌｕｎｃａｎｃｅｒ．ｓ　　　　　　　　ｐｇｐｇｇ　　　

Ｋｅｙ　

ｗｏｒｄｓ：ＲＢＭ５；ＥＧＦＲ；ＫＲＡＳ；ＮＳＣＬＣ　　肺癌是世界上发病率和死亡率最高的最恶性肿瘤，预计２０１８年新增肺癌病例２１０万例，死亡１８０

万例，占癌症死亡人数的五分之一（１８．４％）

［１］

。肺癌通常分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌

（ＮＳＣＬＣ）［２］

。我国每年新发肺癌病例约７３．３万

例，其中非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）占８０％－８

５％［３］

。肺癌患者五年总生存率为１７％，而临床ＩＶ期的肺

癌患者的五年生存率低于２％［

４］

。因此积极探索肺癌的发病机制，发现新的肺癌相关生物标志物对改善肺癌患者的治疗和预后至关重要。

ＲＮＡ结合基序蛋白－５（ＲＮＡ　ｂｉｎｄｉｎｇ　

ｍｏｔｉｆ　５，ＢＭ５）是ＲＢＭ（ＲＮＡ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｍｏｔｉｆ）家族成员之一，也是ＲＢＭ家族中最受关注的成员。ＲＢＭ５（也被称为ｇ１５、ＬＵＣＡ－１５及Ｈ３７）位于假定的人类肿瘤抑制基因区域３ｐ２１．３。这个区域共有１９个基因，这１９个基因都在不同程度上表现出了相应的肿

瘤抑制作用，ＲＢＭ５位于这１９个基因的末端［５－７］。

ＢＭ５主要分布于细胞核，具有识别、结合ＲＮＡ，参与机体内ＲＮＡ转录、翻译、基因表达、细胞增殖以及细胞周期及凋亡等功能，目前研究证实，

ＢＭ５是潜在的肿瘤抑制因子［８］。

表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇ

ｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）信号转导系统在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的发病中起了非常重要的作用，尤其在腺癌的发病过程中。研究表明，８０％的ＮＳＣＬＣｓ患

者，ＥＧＦＲ的表达增高［９］

；２０％的肺癌患者组织中（多见于支气管肺泡癌及腺癌）ＨＥＲ２的表达增

高［１０］

；同时也发现，

在许多不同病理类型的肺癌中，鼠类肉瘤病毒癌基因（ＫＲＡＳ

）的表达明显增高。除此之外，研究发现［１１］

：腺癌病人的ＫＲＡＳ、ＥＧＦＲ及

ＨＥＲ２的基因突变多与吸烟史有关。例如：ＥＧＦＲ

的基因突变多见于无吸烟史的腺癌病人（尤其是亚洲女性）；而ＫＲＡＳ的基因突变多见于有吸烟史的

腺癌及鳞癌病人（非亚裔男性）；ＫＲＡＳ的基因突变也见于无吸烟史的腺癌病人，但其突变类型不同于有吸烟史的腺癌及鳞癌病人。

本课题组［１２］

前期研究已经证实：

在人非小细胞肺癌组织中肿瘤抑制基因ＲＢＭ５表达降低，癌基因ＧＦＲ，ＫＲＡＳ表达增高，提示ＲＢＭ５基因表达缺失

与ＥＧＦＲ，ＫＲＡＳ基因过表达共同参与了非小细胞肺癌的发生。在人非小细胞肺癌中ＲＢＭ５蛋白表

（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，２０１９，２３：０３０３）达水平与ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ蛋白表达呈负相关，ＲＢＭ５可能作为ＥＧＦＲ途径的上游基因，可在体内微环境中，通过增加ＲＢＭ５表达下调ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ水平

的途径，抑制肺癌组织、细胞增殖。对驱动基因及突变基因的检测是针对ＮＳＣＬＣ患者国内、外诊治的共识，但该技术因所需组织标本取材困难，操作流程繁琐，周期长，对设备要求高，故难以推广，且目前大多数研究项目及临床应用主要是针对已经诊断的肺癌或肺癌晚期病人，从而指导ＮＳＣＬＣ患者靶向用药方案，故组织中目的基因的检测尚不能也不适合做到ＮＳＣＬＣ早期诊断及疗效评估。而本实验将组织中基因水平的检测，转化为血清中目的蛋白的检测，相比较于组织的取材困难，患者血清的获得较为简单，而基因水平的检测也较蛋白水平的检测较为繁琐，故如果血清中驱动基因和突变基因表达水平与组织中具有较高的相似性，我们便可以用血清中目的基因表达水平的检测来代替组织中目的基因的检测，从而做到ＮＳＣＬＣ早期诊断及疗效评估。

本研究通过测定组织及血清中上述基因表达水平，比较组织与血清表达水平差异，分析三者与临床病理类型，淋巴结转移，吸烟史，年龄，性别等的关系；从而为非小细胞肺癌的精准诊治提供更方便快捷的实验室检测方法。

１　资料与方法１．１　一般资料　选择２０１７年８月至２０１８年８月在吉林大学第二医院收治的４４例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者作为实验组，所有患者均经术后病理或支气管镜活检病理证实为非小细胞肺癌（其中有２例经支气管镜活检病理证实，

故只有血清，无癌组织与癌旁组织）。其中鳞状细胞癌２２例，腺癌２２例；按照国际肺癌研究学会（ＩＡＳＬＣ）２０１７年颁布的

第８版肺癌ＴＮＭ分期［１３］

进行划分：Ⅰ期１０例，Ⅱ

期２１例，Ⅲ期１０例，Ⅳ期３例。其中男性３２例，女性１２例，年龄为４６－７８岁，平均年龄为６１．００±７．２７岁；选取同期健康体检人２２例作为对照组，其中男性１０人，女性１２人，年龄为４７－８３岁，平均年龄６１．００±１１．０５岁；

经相关检查未发现肺癌或其他肿瘤性疾病。

１．２　入组标准及排除标准　非小细胞肺癌入组患者结合临床症状、体征，均经病理学确诊为非小细胞肺

ＲＲＲｒＥ中国实验诊断学　２０１９年２月　第２３卷　第２期

癌，均具有完整的病历资料。排除存在严重心脏及肝肾疾病、自身免疫性疾病、严重并发症等情况患者。１．３　主要试剂和仪器　Ｌｉｇｈｔ　Ｃｙ

ｃｌｅｒ　４８０Ⅱ高通量实时荧光定量ＰＣＲ仪（罗氏，美国），ＴｒａｎｓＺｏｌ　ＵｐＰＬＵＳ　

ＲＮＡ　Ｋｉｔ（北京全是金生物技术有限公司，中国），ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ　Ａｌｌ－ｉｎ－Ｏｎｅ　Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓ　ＳｕｐｅｒＭｉｘ　ｆｏｒ　ｑＰＣＲ（Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ　

ｇＤＮＡＲｅｍｏｖａｌ）（北京全是金生物技术有限公司，中国），ＤＮＡ引物合成（

生工生物有限责任公司，中国），ＴｒａｎｓＳｔａｒｔ　Ｔｏｐ　Ｇｒｅｅｎ　ｑＰＣＲ　ＳｕｐｅｒＭｉｘ（北京全是金生物技术有限公司，中国），ＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒（碧云天，中国），兔抗ＲＢＭ５多克隆抗体（生工生物工程（上海）股份有限公司，中国）Ｈｕｍａｎ　ＥＧ－ＦＲ　ＥＬＩＳＡ　ＫＩＴ（Ｒ＆Ｄ，美国），Ｈｕｍａｎ　

ＫＲＡＳＥＬＩＳＡ　ＫＩＴ（Ｒ＆Ｄ，美国），Ｈｕｍａｎ　ＲＢＭ５ＥＬＩＳＡＫＩＴ（江莱生物，中国），Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　

Ｖａｒｉｏｓ－ｋａｎ　Ｆｌａｓｈ全波长扫描式多功能读数仪（赛默飞世尔科技，美国）

１．４　ＲＴ－ＱＰＣＲ法检测组织中ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ　

ｍＲＮＡ表达水平　用Ｔｒｉｚｏｌ法提取上述肺癌及癌旁组织标本中总ＲＮＡ，反转录试剂盒将ＲＮＡ反转录合成ｃＤＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ的相对表达水平，

引物由上海生工生物有限公司合成（表１）。根据Ｃｔ值采用法计算癌及癌旁组织目的基因的相对表达水平，△Ｃｔ值＝目的基因Ｃｔ值－内参基因Ｃｔ值。

１．５　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ法测定组织中ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ蛋白表达水平　采用ＲＩＰＡ裂解缓冲液冰上

裂解组织，ＢＣＡ法测定蛋白浓度，每个样品取３０μｇ上样，１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，将蛋白转移至ＰＶＤＦ膜上，用含５％脱脂乳封闭２ｈ，与上述基因抗体（按说明书稀释比例稀释），４℃孵育过夜。经ＰＢＳＴ洗涤３次，加入ＨＲＰ标记的相应二抗（

稀释比例１∶２０００），室温摇床孵育４０ｍｉｎ，ＴＢＳＴ洗涤３次，加入ＥＣＬ显色，

采用化学发光成像仪检测目的蛋白的相对表达水平，内参采用β－ａｃｔｉｎ。１．６　ＥＬＩＳＡ法测定ＮＳＣＬＣ和正常人血清中

ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ及ＫＲＡＳ蛋白表达水平　严格按ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ检测试剂盒进行操作，检测ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ的表达水平。加样，３７℃温育３０ｍｉｎ，洗涤５次，加酶标抗体５０μｌ，温育、洗涤，加显色液显色，检测其吸光度（Ａ）值，根据标准曲线计算出ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ的水平。

１．７　统计学分析　采用ＳＰＳＳ　

２４．０统计软件进行—３０

５—统计学分析。先对数据进行正态性检验，根据实验数据是否符合正态分布，使用ｔ检验或Ｗｉｌｃｏｘｏｎ符

号秩检验进行统计分析。检验水准α＝０．０５。用Ｇｒａｐ

ｈＰａｄ　Ｐｒｉｓｍ　６．０软件作图。２　结果２．１　肺组织中ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ　ｍＲＮＡ及蛋白表达水平

肺癌和癌旁组织中上述基因ｍＲＮＡ表达水平

（２

Δｃｔ）均呈非正态分布。２．１．１　癌旁组织ＲＢＭ５ｍＲＮＡ的表达水平最小值

为１．７７×１０－３

，最大值为３．７３，中位数为４．５４×

１０－２

，９５％区间距为０．０５１－０．６５５。肺癌组织ＲＢＭ５ｍＲＮＡ的表达水平最小值为５．４５×１０－３，最大值为０．３３，中位数为３．３５×１０－２

，９５％区间距为０．０３４－０．０７１；肺癌组织中ＲＢＭ５ｍＲＮＡ的表达水平显著

低于癌旁组织（Ｐ＜０．０５

）。２．１．２　癌旁组织ＥＧＦＲ　ｍＲＮＡ的表达水平最小值

为４．１４×１０－３

，最大值为０．３０，中位数为３．６５×

１０－２

，９５％区间距为０．０３６－０．０９４。肺癌组织ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达水平最小值为１７．７４×１０

－３

，最大值为１．１０，中位数为５．０４×１０－２，９５％区间距为０．０２８－０．１６８。肺癌组织中ＥＧＦＲ　ｍＲＮＡ的表达水平显著高于癌旁组织（Ｐ＜０．

０５）。癌旁组织ＫＲＡＳ　

ｍＲＮＡ的表达水平最小值为０．８０×１０－３

，最大值为０．９９，中位数为２．５９×１０－２，

９５％区间距为０．０７３－０．２８８。肺癌组织ＫＲＡＳ　ｍＲ－ＮＡ的表达水平最小值为６．

９２×１０－３

，最大值为０．９７，中位数为５．５３×１０－２，９５％区间距为０．１１６－０．３１１；肺癌组织中ＫＲＡＳ　

ｍＲＮＡ的表达水平高于癌旁组织，但二者之间没有统计学差异（表２）。非小细胞肺癌组织中ＲＢＭ５蛋白质表达水平较癌旁组织降低，ＥＧＦＲ蛋白水平升高，ＫＲＡＳ表达水平没有明显变化。（图１

）。Ｐ：ｐ

ａｒａ－ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｔｉｓｓｕｅｓ；Ｔ：ｔｕｍｏｒＦｉｇ．１　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＲＢＭ５，ＥＧＦＲ　ａｎｄ　ＫＲＡＳ　ｐ

ｒｏｔｅｉｎ　ｉｎＮＳＣＬＣ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｐａｒａ－ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｂｙ　

Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ—３０６—

ａｂ．１　ＰｒｉｍｅｒｓｅｕｅｎｃｅｓｏｆＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲＴ　　　　　ｑ

Ｇｅｎｅ　ＲＢＭ５

’’）３Ｐｒｉｍｅｒ（５－ＣＦ：ＣＡＴＣＡＣＡＧＡＧＡＧＣＧＡＴＡＴＴＣＧ　

：ＲＣＧＧＣＴＴＡＣＡＣＣＴＧＴＴＴＴＣＣＴＣ

，ＣＮｈｉｎＪＬａｂＤｉａｎ，Ｆｅｂｒｕａｒ２０１９，Ｖｏｌ２３，ｏ．２　　　　ｇｙ旁组织对比，男性组、低年龄组、无吸烟史组、鳞癌组及有淋巴结转移组癌组织中ＲＢＭ５ｍＲＮＡ表达水平；）降低（高年龄组、无吸烟史组及腺癌组，组Ｐ＜０．０５；织中Ｅ临床Ｐ＜０ＧＦＲ　ｍＲＮＡ表达水平升高（．０５）Ⅰ

期以及无淋巴结转移组，非小细胞肺癌组织中ＫＲＡＳ（）。）表３ｍＲＮＡ表达水平升高（Ｐ＜０．０５

ａｂ．２　ＬｅｖｅｌｓｏｆＲＢＭ５，ＥＧＦＲａｎｄＫＲＡＳｍＲＮＡｉｎＮＳＣＬＣＴ　　　　　　　

ＭｅｄｉａｎＰａｒａ　－Ｔ

Ｔ

ＲＢＭ５　ＥＧＦＲ　ＫＲＡＳ　

）（ＰＲａｎｅＰ２５７５－ｇＰａｒａ　－Ｔ

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Ｐｒｏｄｕｃｔ）（ｓｉｚｅｂｐ

９７１７３１６８１２１

ＥＧＦＲＡＴＧＡＧＡＴＧＧＡＧＧＡＡＧＡＣＧＧ　Ｆ：　

：ＲＣＧＧＣＡＧＧＡＴＧＴＧＧＡＧＡＴＫＲＡＳＡＧＴＴＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＣＧＴＡＧＧ　Ｆ：　Ｒ：ＴＡＣＴＣＣＴＣＴＴＧＡＣＣＴＧＣＴＧＴＧＴＣＧＧＡＰＤＨＴＧＡＣＴＴＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＣＣＣＡ　Ｆ：　ＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣＴＧＴＡＧＣＣＡＡＡＲ：

Ｐ１．３　其中伴有淋巴结转移的非小细胞肺癌ＥＧ２．－Ｒ　ｍＲＮＡ表达水平显著高于无淋巴结转移的非小Ｆ

；细胞肺癌Ｅ与癌ＧＦＲ　ｍＲＮＡ表达水平（０５）Ｐ＜０．

０．０５　０．０４　０．０３　

０．０３　０．０５　０．０６　

０．０．０．０２１４０．０２０７０．０３２＊－－　　０．０．０．０３０９０．０３１２０．０４８＊－－　　０．０．０．０１２２０．０２３５０８１－－　　０．

Ｔａｂ．３　ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＲＢＭ５，ＥＧＦＲ，ａｎｄＫＲＡＳｍＲＮＡｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃｏａｔｈｏｌｏｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｉｎＮＳＣＬＣ　　　　　　　　　ｐｇ

Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ｅｎｄｅｒＧａｌｅ　Ｍ　ｅｍａｌｅ　Ｆ　（）Ａｅｅａｒｓｇｙ０　　≤６０　　＞６

Ｓｍｏｋｉｎｓｔａｔｕｓｇ　ＥＳ　Ｙ　　ＮＯ　Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙｕａｍｏｕｓｃｅｌｌ　Ｓ　　ｑｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　Ａ　Ｌｍｈｎｏｄｅ　ｙｐＰｏｓｉｔｉｖｅ　Ｎｅａｔｉｖｅ　ｇＴＮＭｓｔａｅ　ｇ

Ｎｕｍｂｅｒ

）（ＭｅｄｉａｎＲＢＭ５（ＭｅｄｉａｎＥＧＦＲ）ａｒａＰ－Ｔ　０５０．　０．０３　０．０４　

Ｔ

）（ＭｅｄｉａｎＫＲＡＳ

ａｒａＰ－Ｔ　０．０５　０．０３　０．０４　０．０５　０．０３　０．０５　０．０５　０．０５　０．０７　０．０３　０．０３　０．０４　０．０５　

Ｔ

＊

０．０３

ａｒａＰ－Ｔ　０．０４　０．０２　０．０３　０３０．　０．０２　０４０．　０．０２　０４０．　１３０．　０２０．　０．０４　０．０１　０．１３　

Ｔ

２９　１３　１９　２３　１９　２３　２０　２２　２０　２２　１２　２０　

０．０５　０．０４　０．０５　

＊

０．０４

０．０５０．１１０．０５０．１１０．１３０．０４０．０４０．１３０．１４

＊

０．０３

０．０４　

＊

０．０３

０．０４　０．０２　０．０４＊０．０２＊０．０４　０．０５＊０．０２　０．０３　０．０３　０．０３　

０．０３　０．０４　０３０．　０４０．　０．０３　０５０．　０．０３　０．０４　０．０３　０．０５　

０．０５　

＊

０．０７

０．０５　

＊０．０５

＃０．０７＊０．０４

　Ⅰ　Ⅱ

０．０５　０．０４　０．０５　

＊

０．２３

０．０４０．１３

　Ⅲ０１　

＃：）；ｃＰ＜０．ＴＴｈｅｒｅｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｕｍｏｒａｎｄａｒａａｒｃｉｎｏｍａｔｉｓｓｕｅｓ（０５ｈｅｓｅｃｉｆｉｃｃｌｉｎｉｃａｌｃａｔｅｏｒｉｅｓｉｎｃａｎｃｅｒｔｉｓ　　＊：－－　　　　　　　　　　　　　　ｇｐｐｇ

）ｓＰ＜０．ｕｅｓｗｅｒｅｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（０５．　　ｇｙ　

２　血清中ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ蛋白表达水平２．

血清中上述基因蛋白表达水平均呈正态分布，正常对照组中的ＲＢＭ５蛋白表达水平为（７．７４±

／），肺癌患者血清中Ｒ１．９８ｎｍｌＢＭ５蛋白表达水平ｇ，／）为（肺癌患者血清中Ｒ４．７４±１．６２ｎｍｌＢＭ５蛋ｇ，）白表达水平显著低于正常对照组（其中有Ｐ＜０．０１淋巴结转移组ＲＢＭ５蛋白表达水平（４．１８±１．１９／）明显低于无淋巴结转移组ＲｎｍｌＢＭ５蛋白表达ｇ

（；／））水平（正常对照组中５Ｐ＜０．．３０±１．８１ｎｍｌ０５ｇ

，／）肺癌的ＥＧＦＲ蛋白表达水平为（７．６１±１．９１ｎｌｇ患者血清中ＥＧＦＲ蛋白表达水平为（１０．５１±２．３７／），肺癌患者血清中ＥｎｌＧＦＲ蛋白表达水平显著高ｇ

。正常对照组中的Ｋ于正常对照组（Ｐ＜０．０１）ＲＡＳ，／）蛋白表达水平为（肺癌患者血２．９７±０．７１ｎｍｌｇ，／）清中ＫＲＡＳ蛋白表达水平为（３．８２±１．１３ｎｍｌｇ肺癌患者血清中ＫＲＡＳ蛋白表达水平显著高于正常（）。）对照组（图２Ｐ＜０．０１

中国实验诊断学　２０１９年２月　第２３卷　第２期

—３０７—

ｉ．２　ＬｅｖｅｌｓｏｆｓｅｒｕｍＲＢＭ５，ＥＧＦＲａｎｄＫＲＡＳｒｏｔｅｉｎ；０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕＦＰ＜０．　　　　　　＊＊：　　ｇｐｇｐ

３　讨论

目前肺癌是世界范围内癌症相关死亡率最高的

肿瘤性疾病，每年死亡率１８．４％［１］

。近年来新型肺

癌相关生物标志物的发现及应用对于改善肺癌尤其是非小细胞肺癌的早期诊断、治疗及预后起到至关重要的作用。大量研究结果显示：ＲＢＭ５是调节癌细胞基因转录和ｍＲＮＡ剪接的核蛋白。在神经鞘瘤和７５％原发肺癌样本中发现ＲＢＭ５的表达明显

低于正常组织［１４，１５］

。而目前关于ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ

在癌症中的研究已经证明：ＥＧＦＲ是由细胞外配体

结合域和细胞内酪氨酸激酶域组成的１７０ｋＤ跨膜糖蛋白，它在许多上皮性肿瘤中异常激活，导致细胞增殖、侵袭、转移和预后差，而更重要的是在４０％至

８５％的初级ＮＳＣＬＣ可以检测到ＥＧＦＲ的表达［１

６］

。Ｒ

ＡＳ家族三个成员在细胞中的突变广泛发生在多种人类癌症中，其中ＫＲＡＳ的突变是ＲＡＳ家族成员中最常见的。ＲＡＳ家族中大约在３０％的人类癌

症中发现了突变；当然，这其中也包括肺癌［

１

７］。在本研究中，利用ＲＴ－ｑＰＣＲ法对ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ及ＫＲＡＳ在ＮＳＣＬＣ组织与癌旁组织的ｍＲＮＡ表达

进行检测，结果显示ＲＢＭ５在癌组织中的表达含量明显较癌旁组织低，ＥＧＦＲ的表达含量明显升高，ＫＲＡＳ没有明显相关性，并且经过Ｗｅｓｔｅｒｎ　

ｂｌｏｔ验证组织蛋白质也符合这一趋势，这与梁红［１

２］等人的研究结论相似。进一步分析三种基因与临床及病理相关性发现，在男性组、低年龄组、无吸烟史组、鳞癌组及有淋巴结转移组癌组织中ＲＢＭ５ｍＲＮＡ表达水平显著低于癌旁组织（Ｐ＜０．０５）。高年龄、无吸烟史及腺癌组，非小细胞肺癌组织中ＥＧＦＲ　ｍＲＮＡ表达水平显著高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５）。临床Ⅰ期以及无淋巴结转移组，非小细胞肺癌组织中ＫＲＡＳ

ｍＲＮＡ表达水平显著高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５）

。根据Ａｍｏｓ　

ＣＩ［１８］

的报道：只有不到１１％的重度吸烟者最终发展成恶性肿瘤，提示吸烟与ＮＳＣＬＣ的发病

并无特定关系。相关研究人员同样证明吸烟对

３ｐ

２１．３这一片段抑癌作用并没有明显影响［１９］

，而我们实验的结果得出非吸烟者中癌与癌旁组织中Ｒ

ＢＭ５和ＥＧＦＲ表达含量差异显著，我们实验结论也补充了无吸烟组的ＲＢＭ５表达水平癌与癌旁组

织差异大。而在Ｓｎｊｅｚａｎａ　Ｄｏｇ

ａｎ［２０］

发现ＥＧＦＲ突变在４３％的不吸烟者（ＮＳ）和１１％的吸烟者中。我们的实验结果也与其相符，在无吸烟史的癌组织中ＥＧＦＲ表达明显高于癌旁组织。相关研究表明，

ＥＧＦＲ通路在细胞增殖、血管生成和存活中起重要作用。鉴于其对细胞周期进展、凋亡、血管生成、肿瘤细胞运动和转移的影响，它显然与肿瘤的生长和

进展有关［

２１］

。我们的实验结果也验证了这一结论，有淋巴结转移的非小细胞肺癌ＥＧＦＲ　ｍＲＮＡ表达水平显著高于无淋巴结转移的非小细胞肺癌ＥＧＦＲｍＲＮＡ表达水平（Ｐ＜０．０５

）。这可以指导我们更好的应用ＥＧＦＲ的靶向治疗药物治疗非小细胞肺癌。

目前已有多项［２２］

研究论证了检测血清中ＥＧ－ＦＲ表达含量作为肺癌诊断指标的可行性；而Ｄｒ．

Ｒｙ

ａｎ［２３］

课题组得出血清中ＫＲＡＳ２突变体是结直肠肿瘤复发临床症状表现前的潜在标志；目前还没

有任何关于血清ＲＢＭ５与癌症的报道。本研究结

果显示血清ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ及ＫＲＡＳ在健康者及非小细胞肺癌中都有表达，并且在非小细胞肺癌患者血清中ＲＢＭ５表达水平低于健康者（Ｐ＜０．

０５），而ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ表达高于健康者（Ｐ＜０．０５）。此结果与组织中ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ的结果具有高度相似性，但也得出ＫＲＡＳ在非小细胞肺癌患者血清中高表

达这一结论，此结论与梁红［１

２］等人在测定癌组织中ＫＲＡＳ表达情况时，得出结论一致，以上结果提示血清ＲＢＭ５、ＥＧＦＲ及ＫＲＡＳ可作为非小细胞肺癌患

者新的血清标志物。Ｏｈ等人［１

９］发现肿瘤抑制因子ＲＢＭ５／Ｈ３７改变参与转移相关的基因的表达，表明ＲＢＭ５表达的缺失可能增加肿瘤的转移潜能。我们的研究结果得出伴有淋巴结转移的ＮＳＣＬＣ患者血清中ＲＢＭ５表达含量低于无淋巴结转移患者中血清中，证实了ＲＢＭ５表达降低与转移相关的临床病理特征之间的显著关联，支持上述研究。该结论也

—３０

８—与彭杰等人［２４］在研究胰腺导管癌中ＲＢＭ５与淋巴

结转移相关性得出的结论类似。提示血清ＲＢＭ５可能是预测非小细胞肺癌淋巴结转移的一项指标，与非小细胞肺癌转移有相关性。

综上所述，ＲＢＭ５和ＥＧＦＲ在非小细胞肺癌患者无论是病理标本还是血清中都存在相同趋势，与淋巴结转移均有相关性，而我们检测到ＫＲＡＳ只在ＮＳＣＬＣ患者血清中有明显升高，在此推测肿瘤抑制基因ＲＢＭ５在ＮＳＣＬＣ发生发展过程中起到负性作用，而ＥＧＦＲ和ＫＲＡＳ起到正性作用；血清中ＲＢＭ５和ＥＧＦＲ可能成为判断肿瘤早期转移新指标以及肿瘤新治疗靶点。

作者简介：赵敏（１９９４－），内蒙古自治区包头市人，在读医学硕士；王珂，教授，主任医师，博士研究生导师。参考文献：

［１］Ｂｒａｙ　Ｆ，Ｆｅｒｌａｙ　Ｊ，Ｓｏｅｒｊｏｍａｔａｒａｍ　Ｉ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｌｏｂａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ２０１８：ＧＬＯＢＯＣＡＮ　ｅｓｔｉｍａｔｅｓ　ｏｆ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｗｏｒｌｄ－ｗｉｄｅ　ｆｏｒ　３６ｃａｎｃｅｒｓ　ｉｎ　１８５ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｃａ－Ｃａｎｃｅｒ　Ｊ　Ｃｌｉｎ，２０１８，６８：３９４．

［２］ＭｃＩｎｔｙｒｅ　Ａ，Ｇａｎｔｉ　ＡＫ．Ｌｕｎｇ　

ｃａｎｃｅｒ－Ａ　ｇｌｏｂａｌ　ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ］．ＪＳｕｒｇ　

Ｏｎｃｏｌ，２０１７，１１５：５５０．［３］Ｗａｎｇ　Ｈ，Ｚｅｎｇ　Ｃ，Ｌｉ　Ｘ，Ｗａｎｇ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｓｔ－ｕｔｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ａｆａｔｉｎｉｂ　ａｎｄｇ

ｅｆｉｔｉｎｉｂ　ａｓ　ｆｉｒｓｔ－ｌｉｎｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ＥＧＦＲ－ｍｕｔａｔｅｄ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　

ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｆｕｔｕｒｅ　ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１８．［４］Ｅｔｔｉｎｇｅｒ　ＤＳ，Ｗｏｏｄ　ＤＥ，Ａｋｅｒｌｅｙ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｎｏｎ－Ｓｍａｌｌ　Ｃｅｌｌ　Ｌｕｎｇ

Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｅｒｓｉｏｎ　６．２０１５［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎ－ｓｉｖｅ　Ｃａｎｃｅｒ　

Ｎｅｔｗｏｒｋ：ＪＮＣＣＮ，２０１５，１３：５１５．［５］Ｗｅｉ　ＭＨ，Ｌａｔｉｆ　Ｆ，Ｂａｄｅｒ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　６００－ｋｉｌｏｂａｓｅｃｏｓｍｉｄ　ｃｌｏｎｅ　ｃｏｎｔｉｇ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｍａｐ　ｓｕｒ－ｒｏｕｎｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｌｕｎｇ　

ｃａｎｃｅｒ　ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｇｅｎｅ（ＴＳＧ）ｌｏｃｕｓ　ｏｎｈｕｍａｎ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　３ｐ２１．３：ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｔｏｗａｒｄ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｕｎｇ　

ｃａｎｃｅｒ　ＴＳＧ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９６，５６：１４８７．［６］Ｏｈ　ＪＪ，Ｒａｚｆａｒ　Ａ，Ｄｅｌｇａｄｏ　Ｉ，ｅｔ　ａｌ．３ｐ２１．３ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｇ

ｅｎｅＨ３７／Ｌｕｃａ１５／ＲＢＭ５ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，６６：３４１９．

［７］Ｊｉ　Ｌ，Ｍｉｎｎａ　ＪＤ，Ｒｏｔｈ　ＪＡ．３ｐ２１．３ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｃｌｕｓｔｅｒ：ｐｒｏｓ－ｐｅｃｔｓ　ｆｏｒ　ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｆｕｔｕｒｅ　ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００５，１：７９．

［８］Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ　ＬＣ，Ｗａｎｇ　Ｋ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　ＡＧ．ＲＢＭ５ａｓ　ａ　ｐｕｔａｔｉｖｅｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｇｅｎｅ　ｆｏｒ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｏｒａｃｉｃ　ｏｎ－ｃｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ　ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅＳｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｌｕｎｇ　

Ｃａｎｃｅｒ，２０１０，５：２９４．［９］Ｃｉａｒｄｉｅｌｌｏ　Ｆ，Ｔｏｒｔｏｒａ　Ｇ．ＥＧＦＲ　ａｎｔａｇ

ｏｎｉｓｔｓ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８，３５８：１１６０．［１０］Ｈｉｒｓｃｈ　ＦＲ，Ｖａｒｅｌｌａ－Ｇａｒｃｉａ　Ｍ，Ｃａｐｐ

ｕｚｚｏ　Ｆ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆＥＧＦＲ　ａｎｄ　ＨＥＲ２ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌｌｕｎｇ　

ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００９，２８Ｓｕｐｐｌ　１：Ｓ３２．［１１］Ｂａｅ　ＮＣ，Ｃｈａｅ　ＭＨ，Ｌｅｅ　ＭＨ，ｅｔ　ａｌ．ＥＧＦＲ，ＥＲＢＢ２，ａｎｄ　

ＫＲＡＳｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｋｏｒｅａｎ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　

ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１９，Ｖｏｌ　２３，Ｎｏ．２Ｃａｎｃｅｒ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｇ

ｅｎｅｔｉｃｓ，２００７，１７３：１０７．［１２］Ｌｉａｎｇ　Ｈ，Ｚｈａｎｇ　

Ｊ，Ｓｈａｏ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆＲＢＭ５，ＥＧＦＲ　ａｎｄ　ＫＲＡＳ　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　＆ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ：ＣＲ，２０１２，３１：３６．

［１３］Ｄｅｔｔｅｒｂｅｃｋ　ＦＣ，Ｃｈａｎｓｋｙ　

Ｋ，Ｇｒｏｏｍｅ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ＩＡＳＬＣ　ＬｕｎｇＣａｎｃｅｒ　Ｓｔａｇｉｎｇ　Ｐｒｏｊｅｃｔ：Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　Ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｒｏｐｏｓａｌｓ　ｆｏｒ　Ｒｅｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｓｔａｇｅ　Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＳＣＬＣ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｆｏｒｔｈｃｏｍｉｎｇ（Ｅｉｇｈｔｈ）Ｅｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅＴＮＭ　Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｈｏｒａｃｉｃ　Ｏｎ－ｃｏｌｏｇｙ

，２０１６，１１：１４３３．［１４］Ｏｈ　ＪＪ，Ｗｅｓｔ　ＡＲ，Ｆｉｓｈｂｅｉｎ　ＭＣ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ　ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐ

ｒｅｓ－ｓｏｒ　ｇｅｎｅ，Ｈ３７，ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｌｏｃｕｓ　３ｐ

２１．３［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００２，６２：３２０７．［１５］Ｗｅｌｌｉｎｇ　

ＤＢ，Ｌａｓａｋ　ＪＭ，Ａｋｈｍａｍｅｔｙｅｖａ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．ｃＤＮＡ　ｍｉｃｒｏａｒ－ｒａｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ　ｓｃｈｗａｎｎｏｍａｓ［Ｊ］．Ｏｔｏｌｏｇｙ　＆ｎｅｕｒｏ－ｔｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ　ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｏｔｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｎｅｕｒｏｔｏｌｏｇｙ　Ｓｏｃｉｅｔｙ［ａｎｄ］Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｏ－ｔｏｌｏｇｙ　

ａｎｄ　Ｎｅｕｒｏｔｏｌｏｇｙ，２００２，２３：７３６．［１６］Ｇａｔｅｌｙ　

Ｋ，Ｆｏｒｄｅ　Ｌ，Ｃｕｆｆｅ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｉｇｈ　ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｔｈ　ＥＧ－ＦＲ　ａｎｄ　ＩＧＦ１Ｒｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ　ｗｉｔｈ　ｐｏｏｒ　ｐａｔｉｅｎｔ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒｅｓｅｃｔｅｄｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ，２０１４，１５：５８．［１７］Ｗｅｓｔｃｏｔｔ　ＰＭ，Ｔｏ　ＭＤ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｙ　

ｏｆ　ＫＲＡＳ　ｉｎ　ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　

Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，３２：６３．［１８］Ａｍｏｓ　ＣＩ，Ｘｕ　Ｗ，Ｓｐｉｔｚ　ＭＲ．Ｉｓ　ｔｈｅｒｅ　ａ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｌｕｎｇ　

ｃａｎｃ－ｅｒ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］？Ｒｅｃｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈＦｏｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅ　ｄｅｒ　Ｋｒｅｂｓｆｏｒｓｃｈｕｎｇ　Ｐｒｏｇｒｅｓ　ｄａｎｓ　ｌｅｓ　ｒｅｃｈｅｒｃｈｅｓ　ｓｕｒｌｅ　

ｃａｎｃｅｒ，１９９９，１５１：３．［１９］Ｏｈ　ＪＪ，Ｋｏｅｇｅｌ　ＡＫ，Ｐｈａｎ　ＤＴ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｓｉｎｇ

ｌｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｈ３７／ＲＢＭ５ｔｕｍｏｕｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｇｅｎｅ　ａｔ３ｐ２１．３ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｕｂｔｙｐ

ｅｓ　ｏｆ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｓ［Ｊ］．Ｌｕｎｇ　

Ｃａｎｃｅｒ，２００７，５８：７．［２０］Ｄｏｇａｎ　Ｓ，Ｓｈｅｎ　Ｒ，Ａｎｇ　ＤＣ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ　

ｏｆ　ＥＧ－ＦＲ　ａｎｄ　ＫＲＡＳ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　３，０２６ｌｕｎｇ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：ｈｉｇｈｅｒｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｗｏｍｅｎ　ｔｏ　ｓｍｏｋｉｎｇ－ｒｅｌａｔｅｄ　ＫＲＡＳ－ｍｕｔａｎｔ　ｃａｎｃ－ｅｒｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　

Ｒｅｓ，２０１２，１８：６１６９．［２１］Ｈｅｒｂｓｔ　ＲＳ，Ｓｈｉｎ　ＤＭ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｏ　ｔａｒｇｅｔ　ｅｐ

ｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｔｕｍｏｒｓ：ａ　ｎｅｗ　ｐａｒａｄｉｇｍ　ｆｏｒｃａｎｃｅｒ　ｔｈｅｒａｐｙ

［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ，２００２，９４：１５９３．［２２］Ｈａｇｈｇｏｏ　ＳＭ，Ｋｈｏｓｒａｖｉ　Ａ，Ｍｏｒｔａｚ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｇ

ｎｏｓｔｉｃ　ｖａｌｕｅ　ｏｆｒａｒｅ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ＥＧＦＲ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｓｏｌｕ－ｂｌｅ　ＥＧＦＲ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｌｉｇａｎｄｓ　ｉｎ　ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　

ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｐａ－ｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ

，２０１７，５０：２９３．［２３］Ｒｙａｎ　ＢＭ，Ｌｅｆｏｒｔ　Ｆ，ＭｃＭａｎｕｓ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　

ｏｆｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｍｕｔａｎｔ　ＫＲＡＳ２ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｏｒ－ｅｃｔａｌ　ｎｅｏｐｌａｓｉａ：ｓｔｒｏｎｇ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｉｎ　ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｆｏｌ－ｌｏｗ　ｕｐ

［Ｊ］．Ｇｕｔ，２００３，５２：１０１．［２４］Ｐｅｎｇ　Ｊ，Ｖａｌｅｓｈａｂａｄ　ＡＫ，Ｌｉ　Ｑ，Ｗａｎｇ　

Ｙ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆＲＢＭ５ａｎｄ　ＫＲＡＳ　ｉｎ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｄｕｃｔａｌ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｅａｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　ｌｅｔ－ｔ

ｅｒｓ，２０１３，５：１０００．（收稿日期：２

０１８－１０－２０）