维普资讯 http://www.cqvip.com ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２００７ ＶＯＬ．１８ ＮＯ．７ 时珍国医国药２００７年第１ ８卷第７期 紫外分光光度法测定石蒜鳞茎的总生物碱含量 李亚仲 ，单 宇 ，吴志平 ，袁菊红 ，夏冰 （１．南京农业大学生命科学学院，江苏南京２１０００４； ２．江苏省・中国科学院植物研究所，江苏南京２１００１４） 摘要：目的建立一种简单快速的方法来测定石蒜鳞茎总生物碱含量，为石蒜鳞茎质量控制提供依据。方法紫外分光 光度法，以加兰他敏为对照品，测定波长为２８９ ｎｍ。结果加兰他敏在２０．４～１０２．０ ｇ／ｍｌ范围内与吸光度值呈良好的线 性关系，计算得回归方程Ｙ＝０．００８ ４Ｘ一０．０２２ ７，ｒ＝０．９９９ ９（ｎ＝５）；加样回收率为９９．８％，ＲＳＤ：１．４４％；测定结果在５ｈ 内稳定，ＲＳＤ＝０．６４％；不同来源石蒜鳞茎的总生物碱含量差异较大，栽培石蒜鳞茎的总生物碱含量可以达到并超过野生 石蒜。结论该测定方法稳定、快速、简便，测定结果良好。 关键词：石蒜； 总生物碱； 紫外分光光度法 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０８０５（２００７）０７—１６９５－０２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｉｎ Ｂｕｌｂ ｏｆ Ｌｙｃｏｒｉｓ ｒａｄｉａｔｅ ｂｙ ＵＶ—ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｙ ＬＩ Ｙａ—ｚｈｏｎｇ。ＳＨＡＮ Ｙｕ ，ＷＵ ｚｈｉ—ｐｉｎｇ。，，ＹＵＡＮ Ｊｕ—ｈｏｎｇ ，ＸＩＡ Ｂｉｎｇ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，№ ｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ，№ ｎｇ ２１０００４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＢｏｔａｎｙ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｃｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，№ ｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｂｕｌｂ ｏｆ厶ｒａｄｉａｔｅ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｔｏｔｌａ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ｔｅｓｔｅｄ ａｔ ２８９ ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｇａｌａｎｔｈａｍｉｎｅ ｗｅｒｅ ｌｉｎｅａｒ（ｒ＝０．９９９ ９），ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ，ｒａｔｅ ｗａｓ ｐｅｒｆｅｃｔ（９９．８％）．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｉｎ ５ ｈｏｕｒｓ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔｌａ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｂｕｌｂｓ ｗｅｒｅ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ， ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕｉｃｋ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｌｙｃｏｒｉｓ ｒａｄｉａｔａ；Ｔｏｔａｌ ａｌｋａｌｏｉｄｓ； ＵＶ—ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｙ 石蒜（Ｌｙｃｏｒ／ｓ ｒａｄｉａｔａ）为石蒜科（Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ）石蒜属多年 法，为石蒜鳞茎品质分析提供参考。同时我们利用该方法对不同 生草本植物，主要分布于长江流域及西南各省。据《本草纲目》 栽培方式及野生石蒜鳞茎的总生物碱含量进行了测定比较。 等记载，石蒜具有解毒、祛痰、利尿、催吐等功效，主治痈疮恶核、 １器材 咽喉肿痈、水肿等。石蒜的鳞茎含有石蒜碱（Ｌｙｃｏｒｉｎ）、加兰他敏 ＵＶ一２５０１ＰＣ型分光光度计（日本岛津公司）；电子天平（北 （Ｇａｌａｎｔｈａｍｉｎｅ）、水仙碱（Ｔａｚｅｔｔｉｎｅ）、石蒜来宁（Ｌｙｃｏｒｅｎｉｎｅ）、普洛 京赛多利斯仪器系统有限公司）；加兰他敏对照品（中国药品生 维因（Ｐｌｕｖｉｉｎｅ）、石蒜胺（Ｌｙｃｏｒａｍｉｎｅ）、维他廷（Ｖｉｔａｔｉｎｅ）、亥派斯 物制品检定所）；所用试剂均为国产分析纯。 特林（Ｈｉｐｐｅａｓｔｒｉｎｅ）等十多种生物碱和重要医药成分。石蒜碱是 取盛花期开花植株的鳞茎，切成片后于５５～６０℃干燥１２ｈ， 治疗阿米巴痢疾药吐根代用品的原料，也有一定抗癌作用；加兰 粉碎后过８０目筛备用。石蒜鳞茎来源于４个不同样地。分别来 他敏、石蒜胺（力可拉敏）在临床上为治疗＆Ｊｋ麻痹后遗症恢复 自于南京汤山、南京紫金山的两个野生居群及江苏省中科院植物 神经功能的要药。１９９５年版《中国药典》记载，加兰他敏的氢溴 研究所２个不同栽培样点。 酸盐为原料药和注射液已成功用于小儿麻痹后遗症、重症肌无 ２方法与结果 力、肠麻痹的治疗以及手术后的催醒剂。近年来，国内外将其用 ２．１样品供试液的制备称取石蒜鳞茎粉末（过８０目筛）１２．０００ 于轻中度阿尔茨海默症（ＡＤ）的治疗。加兰他敏作为第２代胆碱 ｇ，置于平底烧瓶中，加１２ ｍｌ １０％ＮａＯＨ溶液，静置１５ ｍｉｎ，加５０ 酯酶抑制剂，因其药效持续时间长，不良反应小，服药方便，而日 ｍｌ醋酸乙酯（Ｐ＞０．９００），摇匀后放在８０℃水浴中，保持回流。 益受到各国研究人员及临床医师的青睐 。 第１次回流２ ｈ，第２次回流１ ｈ，第３次回流１ ｈ。将滤液合并， 目前，国内外对石蒜的研究主要集中在石蒜生物碱的成分分 减压浓缩至干，用甲醇定容至２５ ｍｌ，将此溶液过滤后，用移液 析，引种栽培和临床药效的研究 。何丽一等 ” 曾利用分 精密吸取５０ ｌ入１０ ｍｌ容量瓶，用甲醇定容至１０ ｍｌ备用。 光光度法分别对石蒜碱、氢溴酸加兰他敏进行了测定，而对石蒜 ２．２波长扫描以甲醇为空白对照，将标准对照品溶液、样品供 鳞茎总生物碱含量的测定方法研究未见报道，石蒜鳞茎总生物碱 试液和空白对照液在２００～７００波长范围内进行扫描。结果显示 含量的测定对于研究石蒜生物碱代谢，控制石蒜质量，合理栽培、 前两者在（２８９±２）ＲＩＢ处有最大吸收值，且吸收峰相同，而空白 采收，提高提取率具有重要意义。本文主要目的在于建立一套稳 对照液在２８９ ｎｍ处几乎没有吸收，故本实验选择２８９ｎｍ为测定 定、快速、简便，测定结果良好的石蒜鳞茎总生物碱含量测定方 波长。见图１。 ２．３稳定性实验室温下取４０．８ ｇ／ｍｌ的对照品溶液，分别在 １，２，３，４，５ ｈ后，于２８９ ｎｍ处测定吸光度。结果５ ｈ内稳定，ＲＳＤ 收稿日期：２００６—１０—２３； 修订日期：２００７４）３—１４ ＝０．６４％。 作者简介：李亚仲（１９６９一），男（汉族），江苏淮安人，现为南京农业大学生 ２．４标准曲线精密称取加兰他敏对照品０．０２５ ５ ｇ，置于２５ ｍｌ 命科学学院在读博士，硕士学位，主要从事资源植物次生代谢研究工作． 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得到１ ０２０ ｇ／ｍｌ对照品溶液。 通讯作者简介：夏冰（１９６０一），男（汉族），云南宣威人，现任江苏省中 科院植物研究所研究员，博士学位，主要从事药用植物等方面的研究 精密量取对照品溶液０．１，０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ ｍｌ入１０ ｍｌ容 量瓶，补甲醇至刻度。以甲醇为空白于２８９ ｎｍ下测定吸光度值。 工作． 以取样量为横坐标，吸光度值为纵坐标，计算得回归方程Ｙ＝ ・ｌ６９５・ 维普资讯 http://www.cqvip.com 时珍国医国药２００７年第１ ８卷第７期ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＡＮＤ ＭＡＴＥＲＩＡ ＭＥＤＩＣＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ２００７ ＶＯＬ．１ ８ ＮＯ．７ 一波长处有最大吸收，其吸收度与生物碱的含量成正比的原理进 ｇ／ｍｌ浓度范围内与吸光度值呈良好的线性关系。结果见图２。 行定量测定的。该法已成功运用于多种中草药总生物碱含量的 。 ２．５精密度实验取５份标准对照液０．５ ｍｌ，照２．４测定方法制 测定 ’石蒜生物碱大多溶于水、乙醇、醋酸乙酯、氯仿等。用水提取 备标准品供试液和空白对照液，在２８９ ｎｍ波长处测定吸光度值， 药粉易糊化；用酸性水溶液提取法提取，在后面的萃取过程中易 ＲＳＤ为０．５１％，表明精密度较好。 造成加兰他敏及其他水溶性石蒜生物碱的流失。因此，本研究采 用亲脂性有机溶剂提取法，提取液回收溶剂后即得总生物碱，尽 量减少了生物碱的流失。 从总生物碱的测定结果来看，不同的生长环境对石蒜鳞茎的 总生物碱含量有较大的影响。野生居群石蒜鳞茎总生物碱含量差 异较大，这可能是由于环境条件的差异导致植物能量及物质代谢 的变化，进而影响生物碱代谢的变化；人工栽培居群石蒜鳞茎的总 ０．００８ ４Ｘ一０．０２２ ７，ｒ＝０．９９９ ９（ｎ＝５），加兰他敏在２０．４～１０２ 生物碱含量可以达到并超过野生居群。该结果可为石蒜鳞茎的品 质分析及进一步研究合理的栽培条件提供一定的参考依据。 参考文献： ［１］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草［Ｍ］．上海：上海 科学技术出版社，１９９９，８：２０７． ［２］贾献慧，周铜水，郑颖，等．石蒜科植物生物碱成分药理学研究 ［Ｊ］．中医药学刊，２００１，１９（６）：５７３． ［３］ 阮龙喜．石蒜科植物生物碱的一些研究进展［Ｊ］．药学通报，１９８８， Ｇａｌ ａｎｔ ｈａｍｌ ｎｅ Ｕｇ１３Ｉ ２３（８）：４５３． 图２加兰他敏标准曲线 ［４］ 洪霞，张振馨，王鲁宁，等加兰他敏治疗轻中度阿尔茨海默病的 ２．６加样回收率实验用１００ Ｉ．ｄ移液取已知总生物碱含量的 随机双盲对照研究［Ｊ］．中华神经科杂志２００６，３９（６）：３７９． 石蒜鳞茎样品液一式５份各５０ ，置于１０ ｍｌ容量瓶中，分别加 ［５］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅱ部［Ｓ］．北京：化学工业出版社， ２００５：４４６． 入浓度为１ ０２０ ｇ／ｍｌ的对照品溶液０．３ ｍｌ。在每个容量瓶中分 ［６］吴芳丽，李爱珍，王慧芳，等．ＲＰ—ＨＰＬＣ测定石蒜中加兰他敏含量 别补甲醇至刻度，摇匀后依法测定，计算其回收率，平均加样回收 ［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（７）：５２３． 率为９９．８％， Ｄ＝１．４Ｊ４％。 ［７］ 张露，曹福亮．石蒜属植物栽培技术研究进展［Ｊ］．江西农业大 ２．７样品总生物碱的测定取不同来源样品，按２．１的方法制备 学学报２００１，２３（３）：３７５． 样品供试液和空白对照液，在２８９ ｎｍ波长处分别测定吸光度并 ［８］马广恩．加兰他敏治疗老年痴呆的研究概况［Ｊ］．药学进展，１９９８， 计算总生物碱相对含量。从表１可以看出，不同来源石蒜鳞茎的 ２２（３）：１５３１． 总生物碱含量不同。中山植物园梅林栽培居群石蒜鳞茎总生物 ［９］ 方玲．郝素娥，叶铭龙．紫外分光光度法测定氢澳酸加兰他敏片 碱的含量最高；南京紫金山野生居群总生物碱含量最低。 的含量及含量均匀度［Ｊ］．上海医药，１９９８，１９（９）：３５． ［１Ｏ］何丽一，陈阑英．石蒜碱的纸层分离和分光光度测定［Ｊ］．药学学 表１ 不同居群石蒜鳞茎的总生物碱含量 报，１９６３，１０（１）：１． 居群 样 量 吸光度 生物 ［１１］赵庆国，吴素体，王颖，等 不同品种和产地黄连的总生物碱含量 。： 测定［Ｊ］．时珍国医国药，２００１，１２（１１）：９７４． 南京汤山 １２．０１２ ０ ０．３１５ １６．４０ ［１２］王伟，谭晓梅．荷叶总生物碱含量测定方法的研究［Ｊ］．中药材， 南京紫金山 １２．００８ ５ ０．２５９ １３．６７ ２００４，２７（１）：５０． 中山植物园梅林 １２．０１４ ８ ０．３２１ １６．６８ ［１３］程华，余龙江，胡琼月，等．分光光度法测定岩黄连不同部位总 主些焦塑旦堑塑垦 ： ！ ： ！ ：丝 生物碱的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（３）：３６４． ３讨论 ［１４］孙文基，谢世昌．天然药物成分定量分析［Ｍ］．北京：中国医药科 紫外分光光度法是根据生物碱分子结构的不同，在紫外区某 技出版社，２００３：５２３． ≮ ０ 敬告作者 尊敬的作者： 您好！欢迎您给本刊投稿！感谢您对本刊多年来的支持和厚爱！为使您能在最短的时问内完成投稿和查询，从即 日开始可通过我刊网站ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｈｉｚｈｅｎｃｈｉｎａ．ｃｏｎ，投稿。目前我刊试开通“投稿系统”，分为“在线投稿”和“稿件查 询”两部分，现将该系统的操作说明如下： １．在线投稿 登陆我刊网站后，点击页面左方的“在线投稿”链接进入，将您的文章标题、正文、联系方式、姓名及密码（任意设 置，４～６位均可）依次输入，点击“确定提交”，成功后会自动显示“投稿完成！请牢记稿件编号，用户名，密码”。上传正 文敬请作者用“Ｗｏｒｄ”文档格式上传。 ２．稿件查询 登陆我刊网站后，点击页面左方的“稿件查询”链接进入，将您的稿件编号、用户名、密码依次输入后，点击“查询” 即可看到您所投文章的处理意见及审稿费、发表费、发表时间栏目以及责任编辑。 《时珍国医国药》杂志社 ・１６９６・
