中外妇儿健康 ２０１１年６月第伯卷第６期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｎｄ Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｗｏｍｅｎ Ｈｅａｌｔｈ 论 著 ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白作为原发性肝癌分子切缘界定指标的研究 吕宝军 谢小铭。 曾庆安 苟新敏。 王晓鸿。 【中图分类号］Ｒ７３５．７ 【文献标识码】Ａ 【文章编号］１６７２－－６３８３－－（２０１１ Ｊ０６－－００７５－－０２ 【摘要１目的：通过分析ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白在癌组织和癌旁不同距离组织中的差异表达，探讨原发性肝癌手术切缘的分子边界。方法：应用免 疫组织化学方法研究５１例原发性肝癌和癌旁不同距离组织（距离肿瘤１、２、３ ｃｍ）中ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白的表达情况。结果：ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白在 原发性肝癌和癌旁不同距离组织中的表达呈现逐渐减弱的趋势，其递减表达差异具有统计学意义（Ｐ均＜Ｏ．０５）。结论：ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白在原发 性肝癌和癌旁不同距离组织中趋势性差异表达，原发性肝癌手术切缘组织中存在分子边界。 【关键词】原发性肝癌；ＰＣＮＡ；ｐ５３蛋白；分子切缘 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ＰＣＮＡ ａｎｄ ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ ｍａｒｇｉｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ＬｙＢａＯ—Ｊｕｎｌ，ＸＩＥＸｉａｏ—ｒａｉｎ２，ＺＥＮＧＱｉｎｇ—ａｎｌ，ＧＯＵＸｉｎ—ｒａｉｎ３，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ—ｈｏｎｇ０ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｏｕｎｄａｒｙ ｏｆ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｍａｒｇｉｎ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ１ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ＰＣＮＡ ａｎｄ ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＰＣＮＡ ａｎｄ ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ５１ ｐｒｉ． ｍａｒｙ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ（ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ １，２，３ ｃｍ）ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＰＣＮＡ ａｎｄ ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ Ｉｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｇｒａｄｕａｌ ｗｅａｋｅｎｉｎｇ ｔｒｅｎｄ．ｔｈａｔ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉ— ｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ ａｌｌ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：ＰＣＮＡ ａｎｄ ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｔｒｅｎｄ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎｓ．Ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ ｍａｒｇｉｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｄｅｅｄ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｐｒｉｍａｒｙ １ｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）ＰＣＮＡ；ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ）Ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ ｍａｒｇｉｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ 原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，自２０世纪９Ｏ年代以 细胞核，少数在细胞浆。阳性染色细胞标准为细胞结构清晰、阳性颗粒 来肝癌的年死亡率已上升为城市和农村恶性肿瘤死亡率的第二和第一 定位好、着色与背景对比清楚。按阳性细胞百分率记分：≤５ 为０分， 位。肝癌根治切除术后的高复发率，尤其是切缘复发，说明所采用的标 ６Ｎ～２５ 为１分，２６ ～５０ 为２分，５１％～７５％为３分；≥７６ 为４ 准只是相对的。对不同大小肝癌的根治性切除时切缘应该多大，既能 分。其次按着色强度分为４个等级，无着色为０分，淡黄色为１分，黄色 保证手术安全，又能完全切除癌周肝组织内的微转移灶，目前仍无统一 为２分，棕黄色为３分，最后将两者积分乘积为０表示阴性（一），＞１ 的定论［”。本课题通过检测原发性肝癌及癌旁组织内ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋 为阳性，其中１～２表示弱阳性（＋），３～４表示阳性（＋＋），≥５为强 白的分布情况，确定ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白作为原发性肝癌分子切缘的界 阳性（＋＋＋）。 定指标，为原发性肝癌的根治性手术所要求切除的肿瘤切缘范围提供 １．５统计学处理：使用ＳＰＳＳ１２．０统计软件进行数据分析。各组数据的 分子病理学基础。 比较采用Ｗｉｌｃｏｘｏｎ检验，检测标准均取为Ｐ＜０．０５差异有统计学 １ 材料与方法 意义。 ｉ．１Ｉ临床资料：收集中山大学附属五院普通外科２００５年１月至２０１０年 ２结果 １２月原发性肝癌患者根治手术后的组织标本５１例，手术记录均为根治 ２．１原发性肝癌和癌旁不同距离组织中ＰＣＮＡ的表达情况：ＰＣＮＡ在 性手术，包括切缘病理无残癌，肉眼肝内无播散、门静脉内无残留癌栓 原发性肝癌组织和癌旁距离肿瘤边缘ｌｃｍ组织以及癌组织和距离肿瘤 和无远处转移。所有病例临床资料完整。 边缘２ｃｍ组织、癌组织和距离肿瘤边缘３ｃｍ组织、距离肿瘤边缘ｌｃｍ １．２主要试剂：特异性鼠抗人Ｐ５３单克隆抗体、ＰＣＮＡ单克隆抗体（武汉 组织和距离肿瘤边缘２ｃｍ组织、距离肿瘤边缘ｌｃｍ组织和距离肿瘤边 博士德生物工程公司）和Ｐｖｇ０００、ＤＡＢ试剂盒（北京中山生物工程公 缘３ｃｍ组织、距离肿瘤边缘２ｃｍ组织和距离肿瘤边缘３ｅｍ组织中的表 司）。 达差异明显，均有统计学意义（ｐ均＜Ｏ．０５），见表１。 １．３实验方法：选取原发性肝癌石蜡标本块，在其中部连续切片６张，切 ２．２原发性肝癌和癌旁不同距离组织中ｐ５３的表达情况：ｐ５３在原发性 片厚５ｂｔｍ，各２张分别进行ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白免疫组织化学染色。原 肝癌组织和癌旁距离肿瘤边缘Ｉｃｍ组织以及癌组织和距离肿瘤边缘 发性肝癌癌旁组织石蜡标本分别距肿瘤边缘起ｌｃｍ、２ｃｍ、３ｃｍ连续水 ２ｃｍ组织、癌组织和距离肿瘤边缘３ｃｍ组织、距离肿瘤边缘ｌｃｍ组织和 平向切片６张，切片厚５ ｍ，各２张分别进行ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白免疫组 距离肿瘤边缘２ｃｍ组织、距离肿瘤边缘１ｅｒａ组织和距离肿瘤边缘３ｃｍ 织化学染色。 组织、距离肿瘤边缘２ｃｍ组织和距离肿瘤边缘３ｃｍ组织中的表达差异 １．４结果判定：ＰＣＮＡ的表达以细胞核内染色为主，ｐ５３的表达多数在明显，均有统计学意义（ｐ均＜Ｏ．０５），见表２。 表１ ＰＣＮＡ在原发性肝癌和癌旁不同距离组织中的表达 ３ 讨论 性切除与姑息性切除，但国内外尚无统一的肝癌根治切除标准，多数由 目前对原发性肝癌理想的治疗应达到根治，手术切除是目前公认 作者根据自己的经验而定，缺乏客观性和统一性。肝癌根治切除术后 的唯一有可能治愈肝癌的手段，是肝癌治疗的首选方案，但手术切除的 的高复发率，尤其是切缘复发，说明所采用的标准只是相对的［ 。切缘 突出问题是手术切除率低，术后复发率高。通常将肝癌切除分为根治 是指肝切除时肝断面至肿瘤边缘的最近距离。汤钊猷等［ａ］主张若肿瘤 边界清楚，最好在距肿瘤边缘２ｅｒａ作切除；边界不清楚时，应距肿瘤边 一７５— 论著 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｎ中外妇儿健康 ｄ Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｗｏｍｅｎ Ｈｅａｌｔｈ ２０１ １年６月第１９卷第８期 缘５ｃｍ作切除；对合并肝硬化的患者，切除范围不应超过全肝的５０％， 以提高患者生存率。明确原发性肝癌手术切缘的分子边界对预防原发 即使作半肝切除也应慎重考虑，最好是作范围较小的局部肝切除。 性肝癌患者术后复发和评估预后都具有重要的意义。 ｐ５３基因是迄今为止被发现与人类肿瘤发生相关性最高的基因，也 参考文献 是目前被最深入研究的肿瘤基因之一，在肿瘤抑癌家族中占主导地位。 Ｅ１］张晓勇．肝细胞癌手术切缘对患者术后复发与生存的影响．山东 医药，２０１１，５１（１）：１０７． 现代分子生物学的发展确定了人类ｐ５３基因位于１７Ｐ１３．１基因编码的 蛋白，分子量为５３Ｘ１０３ ｋｈ，含有３９３个氨基酸序列。在原发性肝癌细 Ｅ２］杜智，高英堂，王裁军，等．肝癌分子边界／切缘建立及相关治疗 胞中，ｐ５３基因结构表达异常是肝癌最常见的基因改变之一［ 。邵根 研究．医学研究通讯，２００５，３４（１Ｏ）：３７￣３８． 泽等［５］检测了８８食管鳞癌患者手术切缘组织ｐ５３基因突变的表达，认 ［３］Ｔａｎｇ ＺＹ，Ｙｕ ＹＱ，Ｚｈｏｕ ＸＤ．Ｓｕｒｇｅｒｙ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒ— ｃｉｎｏｍａ，ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １４４ ｃａｓｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ，１９８９，６４：５２６￣５４１． 为切缘组织ｐ５３基因突变的患者预后差，其肿瘤复发率高，从而确定其 分子边缘，切缘组织ｐ５３基因突变有助于食管癌手术评估和预后判断。 Ｅ４］Ｋａｇｈａｄ Ｍ，Ｂｏｎｎｅｔ Ｈ，Ｙａｎｇ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｎａｌｌｅｌｉｃｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＰＣＮＡ又称周期索，是一种分子量为３６ＫＤ的核蛋白，含有２６１个氨基 ｇｅｎｅ ｔｏ ｐ５３ ａｔ ｌｐ３６，ａ ｒｅｇｉｏｎ ｆｒｅｇｕｅｎｔｌｙ ｄｅｌｅｔｅｄ ｉｎ ｎｅｕｒｂｌａｓｔｏｍａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｃｅｌ１．１９９７；９０（４）：８０９～８１９． 酸，主要存在于增殖细胞核中，在ＤＮＡ复制、细胞增殖和细胞周期 中发挥重要作用。ＰＣＮＡ与肿瘤等细胞增殖性疾病的发生和发展存在 ［５］ 邵根泽，中延琴，李碌，等．食管癌手术切缘组蟹；ｐ５３突变研究． 相关性。赵宗刚［ｓ］和董敬东［ ］的研究都表明了ＰＣＮＡ的表达与肝癌 癌症，１９９９，１８增刊：２７￣２９ 的恶性程度及预后呈正相关关系。因此，我们应用免疫组织化学方法 ［６］赵宗刚，詹勇强，倪勇等．肝癌组织中Ｓｕｒｖｉｖｉｎ蛋白、ＰＣＮＡ的表 检测肝癌及癌旁组织内ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白的分布情况对原发性肝癌手 迭及其与预后的关系．深圳中西医结合杂志，２００７，１７（６）：３５５ ３５７． 术切缘的分子边界进行初步研究。 ～我们对５１例原发性肝癌患者癌组织和癌旁不同距离组织（距离肿 ［７］ 董敬东，王莉芬．原发性肝癌影像学特征与ＰＣＮＡ、ＡＦＰ的表达． 瘤边缘１、２、３ ｃｍ）中ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白的表达情况进行了检测，结果表 中国医药导报，２００８，５（１５）：１６～１８ 明ＰＣＮＡ和ｐ５３蛋白在原发性肝癌组织到癌旁不同距离组织之间的表 达强度呈现逐渐减弱的趋势，该递减表达具有统计学意义。说明在原 作者单位：５１９０００中山大学附属第五医院普外ＩＩ区 发性肝癌周围组织及切缘组织中存在分子边界，在此边界两侧分子蛋 ５１９０００中山大学附属第五医院急诊科。 白的表达存在明显差别，这种差异表达是呈渐进性的。对原发性肝癌 ５１９０００中山大学附属第五医院病理科。 手术患者切缘进行分子生物学检测，确定其手术切缘的分子边界，不仅 基金项目：珠海市科委项目（２００９自筹） 能筛选出预后差的患者，更重要的是可以对这些患者进行及时的干预， 胎死宫内４Ｏ 例母体因素及治疗分析 周 【中图分类号］Ｒ７１４．２３ 【文献标识码】Ｂ 萍 李渊渊 赵富鲜 【文章编号］１６７２－－６３８３一（２０１１）０６－－００７６－－０２ 【摘要】目的：探讨胎死宫内（ＩＵＦＤ）的母体因素及治疗方法。方法：：选择２００４年３月至２０１０年３月本院收治的４０例胎死宫内患者为研究 对象，年龄为２０￣３８岁，平均３０岁；初产妇为３２例（８０．Ｏ ），经产妇为８例（２０．ｏＸ）；孕龄为２２￣３９孕周，平均为３４孕周。采用回顾性分析法 分析胎死宫内的母体相关因素度诊治方法。结果：合并产科并发症患者占胎死宫内比例最大。包括妊娠期高血压疾病１２例（３０．Ｏ ）；前置胎 盘９例（２２．５ ）和胎盘早剥７例（１７．５ ）。脐带因素所占比率次之。治疗措施应根据患者病情、产道条件和胎儿死亡时间综合制定，同时积极 防治胎死宫内并发弥散性血管内凝血（ＤＩＣ）。结论：胎儿缺血缺氧死亡是胎死宫内的主要病因。早期诊断、适时终止妊娠、正确治疗胎死宫－内所 致并发症至关重要。 【关键词】胎死宫内；母体因素；治疗；并发症 胎死官内（ｉｎｔｒａｕｔｅｒｉｎｅ＇ｆｅｔａｌ ｄｅａｔｈ，ＩＵＦＤ）是指围生期胎儿在分娩 视力模糊；８例眼底检查发现视网膜小动脉痉挛（４例伴有视网膜水 发动前宫内死亡。早期胎儿死亡是指孕龄＜２０孕周时ＩＵＦＤ，中、晚期 肿）。１６例（４Ｏ．０ ）伴阴道流血，流血量３００～２０００ｍｌ，其中，７例 分别是指孕龄为２０￣２７孕周及＞２８孕周时ＩＵＦＤ。ＷＨＯ把胎儿死亡 （１７．５ ）伴不同程度休克，表现为贫血貌、冷汗、恶心、血压下降和脉搏 定义为胎儿无呼吸或无任何其他生命征象，如心跳、脐带搏动或明确随 细弱（２例意识丧失，血压为零，脉搏触不清）。７例（１７．５ ）伴腹痛（６ 意运动。我国对ＩＵＦＤ的定义为孕龄＞２０孕周时胎儿死亡及分娩过程 例有强直官缩，宫底上升，压痛明显）。１例（２．５Ｘ）宫壁张力增高。１例 中死产。ＩＵＦＤ在所有已诊断的妊娠胎儿死亡率中占１５～２Ｏ ，而孕 （２．５％）为阴道流水，胎膜早破后人院，发现为足先露，脐带脱垂至阴道 龄＞２０孕周死胎约占全部妊娠的１ 。目前，随着产时胎儿电子监护 内，胎心消失。１例（２．５ ）腹部超声发现胎儿为无脑儿。１例（２．５ ） 水平的提高及剖官产技术的改进，死产发生率明显下降，而产前胎儿死 为妊娠期糖尿病。 亡率却未相应下降，我国围生儿死亡病例中死胎居首位［ ］，本研究采用 １．４胎死宫内诊断方法：本组４０例患者入院后ＩＵＦＤ诊断均采取腹部 回顾性分析法对２００４年３月至２０１０年３月本院诊治的４０例ＩＵＦＤ患 Ｂ超检查明确诊断。 者进行分析，旨在探讨ＩＵＦＤ的母体相关因素及诊治方法。现将研究结 ２ 结果 果，报道如下。 ２．１胎死官内母体相关因素：本组４Ｏ例ＩＵＦＤ患者中，导致ＩＵＦＤ的母 １临床资料及方法 体相关因素比较，显示，部分患者待分娩后仔细检查胎盘明确死因，部 １．１研究对象：选择２００４年３月至２０１０年３月本院收治的４Ｏ例ＩＵＦＤ 分根据胎盘病理学检查及病原体培养结果明确死因。本组４ｏ例ＩＵＦＤ 患者为研究对象，年龄２０￣３８岁，平均为３０岁；均已婚；初产妇为３２例 均未进一步尸检。 （８０．０ ），经产妇为８例（２０．０ ）；孕龄为２２～３９孕周，平均为３４ ２．２胎死官内患者的分娩方式：自（表１）显示，对１２例ＩＵＦＤ合并妊娠 孕周。 期高血压疾病患者，采取镇静、解痉、降压治疗措施后，６例经阴道顺利 １．２临床症状：本组４Ｏ例ＩＵＦＤ患者均有胎动消失症状，就诊时，胎动 分娩，产后患者血压降至正常，恢复良好，均痊愈出院；３例子痫患者经 消失持续时间最短为４ｈ，最长４周，其中，＜２周为２９例（７２．５ ），＞３ 上述治疗抽搐控制４ｈ后，行剖官产术终止妊娠；４例重度子痫前期患者 周为４例（１０．０ ），２～３周７例（１７．５％）。 经上述治疗２４￣４８ｈ后，持续头痛及视力模糊等症状减轻，血压降至 １．３妊娠并发症：本组４Ｏ例ＩＵＦＤ患者中，１２例（３０．０ ）伴妊娠期高血 １４０～１５Ｏ／９０～１００ｍｍＨｇ，予缩官素静脉滴注引产，其中３例在引产过 压疾病，血压为１４Ｏ～１８０／ｇ０～１３０ｍｍＨｇ，双下肢不同程度水肿，尿蛋 程中，血压升高≥１６０／１１０ｍｍＨｇ，并出现头痛、眼花、恶心和呕吐，经对 白＋～＋＋＋，伴头昏、乏力。其中，３例发生子痫抽搐１～３次；４例重 症处理病情无好转，且产程进展缓慢，立即改行剖宫产终止妊娠。９例 度子痈前期患者血压为升高１６Ｏ～１８０／１１Ｏ～１２０ｍｍＨｇ，伴持续头痛及 前置胎盘中，７例阴道流血量５００￣２０００ｍＩ，（６例腹部超声示完全性前 一７６一
