AMAMFSJp0018维生素E 高效液相色谱法 定量
AM-AM-FS-Jp-0018
维生素E的高效液相色谱法的定量测定
1.适用范围
本方法几乎适用于所有的食品中维生素E的测定。
2.原理概要
3.主要试剂和仪器
3.1.主要试剂
无醛乙醇：参照维生素A的测定中的该项；
正己烷：光谱分析用；
无水Na2SO4：将无水Na2SO4在120℃的温度下加热2h后，在干燥器中放冷、密封保存；
α-，β-，γ-，δ-生育酚（维生素E）：d-α-，d-β-，d-γ-，d-δ-生育酚（维生素E）纯品；
母育酚：母育酚纯品；
生育酚同系物标准溶液：生育酚同系物（α-，β-，γ-，δ-生育酚）分别各准确称取100mg，分别以正己烷溶解后，定容100mL。分别各取其5.0mL用正己烷定容25.0mL，装入褐色具塞瓶中，用氮气排除其中的空气，密封，保存于冷暗处（可使用一个月）；
母育酚标准溶液：准确称取母育酚约100mg，加正己烷溶解并定容100mL。取其5.0mL用正己烷定容25.0mL，装入褐色具塞瓶中，用氮气排除其中的空气，密封，保存于冷暗处（可使用一个月）。
3.仪器
化用的烧瓶等容器：参照维生素A的测定中的该项。
效液相色谱仪：带有荧光检测器。
4.过程简述
4.1.试验溶液的调制
称取约含生育酚0.2mg的试料于碱化烧瓶中，加入30mL乙醇及10%的邻苯三酚乙醇溶液1mL，再加入90%（w/v）KOH溶液3mL，连接回馏冷却器，在沸腾水浴中加热碱化30min。碱化后，快速冷却到室温后，加30mL水，将其移至褐色分液漏斗中，分别用10mL水和30mL石油醚清洗碱化烧瓶，将洗液合并到分液漏斗中，振荡萃取，提取石油醚层。水层进一步用石油醚30mL萃取2次，合并石油醚层液，依次用10mL水洗一次，再每次用50mL水洗三次，进一步用50mL水洗至酚酞指示液无色为止。在分液漏斗中分离掉水层后，提取石油醚层，加无水Na2SO4脱水，将石油醚层移至褐色烧瓶中。剩余的Na2SO4每次用10mL石油醚清洗2次，将洗液并入烧瓶中。将石油醚萃取液在水泵减压下（40-45）℃下振动的同时进行蒸馏，残留物用1.0mL正己烷溶解，作为试验溶液。
4.2.高效液相色谱条件
色谱柱：正项色谱柱(4.6mmi.d. ×250mm)
移动相：正己烷:异丙醇（98:2）
流 速：0.5mL/min
检出器：荧光检测器（激发298nm，发射325nm）
4.3.定量：
在试验溶液1.0mL中加入母育酚标准溶液1.0mL（Sμg/mL）,取其10
μL注入高效液相色谱柱中分离测定，求出生育酚同系物的峰高（Bα-δ）和母育酚的峰高（C）。
4.4.换算系数
分别取生育酚各同系物标准溶液1.0mL，加入1.0mL母育酚标准溶液，取其10μL注入高效液相色谱柱中按照前述液相色谱条件进行操作，求出生育酚同系物的峰高和母育酚的峰高，再从10μL中这些物质的重量（μg）求出生育酚同系物对母育酚的换算系数（重量比/峰高比）fα-δ.
5.结果计算
用下式计算100g试料中生育酚同系物的量（μg）。
试料为油脂将其作为试料的情况下，100g试料中生育酚同系物的量（μg）
=S（μg）×(Bα-δ/C) ×fα-δ. ×(100/试料量（g）)
从试料将油脂提取出后作为试料的情况下，100g试料中生育酚同系物的量（μg）
= S（μg）×(Bα-δ/C) ×fα-δ. ×(100/试料量（g）) ×（X/100）
X—试料中油脂含量的百分数。
6.来源
《卫生试验法·注解》2000版 日本药学会编