AMAMFSJp0021烟酸 烟酰胺 柯尼希反应法 定量
AM-AM-FS-Jp-0021
烟酸及烟酰胺的柯尼希反应法定量测定
1.适用范围
本方法是一种优异的快速方法，但是对干扰物较多的试料必须按2.1.6.4中3）的微生物学的试验方法进行定量。
2.原理概要
3.主要试剂和仪器
3.1.主要试剂
饱和ZnSO4溶液：ZnSO4·7H2O800g用水溶解后定容为1L；
溴化氰溶液：溴化氰用水溶解制成10%的溶液。（注意巨毒）；
烟酸标准溶液：准确称取烟酸标准品100mg(?)于100mL的容量瓶中，加入
5mol/LH2SO4 1mL溶解之，以水定容100.0mL。该溶液为原液，保存于避光低温处。使用时分别用水稀释成0.25，0.5，1.0，2.0及2.5mL/100.0mL；
对-乙酰苯胺溶液：对-乙酰苯胺2g用少量的HCl溶解，以水定容为100mL。
4.过程简述
4.1.试验溶液的调制
4.1.1.加水分解
4.1.1.1.动物性试料：100mL烧杯中取相当于400μg的烟酸的试料量，加入1mol/LCa(OH)2悬浊液10mL,再加入水定容50mL，用表面皿盖好，在沸水浴中加热90min，加热期间时常用玻璃棒搅拌之浸出，进行加水分解。然后用流水冷却，移入100mL容量瓶中，用水清洗烧杯，将洗液并入容量瓶中，以水定容100.0mL,再将其离心，取其上清液为试验溶液。
4.1.1.2.植物性试料：100mL烧杯中取相当于400μg的烟酸的试料量，加入6mol/LHCl20mL，在沸水浴中加热60min进行浸出，加水分解。然后用流水冷却，移入100mL容量瓶中，以水定容100.0mL,再将其离心或过滤，取其上清液或过滤液为试验溶液。
4.1.2.中和：
取25.0mL试验溶液于离心管中，加2滴酚酞指示剂，用Ca(OH)2的分解液用6mol/LHCl，HCL加水分解液用6mol/L NaOH中和至微酸性。
4.1.3.脱色：
在中和液中加入饱和ZnSO4溶液2mL，加数滴作为消泡剂的戊醇，随后振摇至生成Zn(?)(OH)2沉淀，再加入3mol/L NaOH和1mol/L NaOH进行中和。接着加入1mol/L H2SO4至pH6(?),进一步加水至50mL(?)。振摇，放置10分钟后，离心或过滤，即为试验溶液。
分别于2只试管中各取试验溶液5mL，分别加入2mL溴化氰溶液在（60～70）℃水浴上反应10～15分钟。然后在冰水中冷却，其中一只管中加入1mL对-乙酰苯胺，另一只作为参比，2只管都用水定容至10.0mL。
发色液在冰水中冷却着放置于暗室10～15分钟后，参照参比测其在420nm处吸光度A。
4.2.标准工作曲线的制作：各浓度的烟酸的标准溶液各1.0mL，加水4.0mL按试验操作进行操作，画出标准工作曲线。
5.结果计算
试验溶液5mL中含烟酸的量在标准工作曲线中对应其吸光度A求出x(μg)。
试料中总烟酸量（mg/100g）
=x×40×（100/试料取样量（g））×（1/1000）
6.来源：
《卫生试验法·注解》2000版 日本药学会编